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臺式低速離心機提取牛血清白蛋白實驗

2016/3/8 16:01:05??????點擊:
一、 實驗原理:
帶點粒子在電場中移動的現象為電泳。通過電泳技術對蛋白的提取,在醋酸纖維素薄膜分離出血清蛋白中的各種蛋白。
二、 實驗步驟:
1、鹽析: 取小牛血清0.5毫升+PBS液0.5毫升+飽和硫酸銨2.3毫升,充分混勻,靜止20分鐘,臺式低速離心機2500轉/分離心10分鐘。
2、透析:取玻璃紙一張,折成袋形,將離心后的上清液倒入袋內,用線扎緊上口(注意要留有空隙),放入裝有自來水的小燒杯中透析,要不斷振動,每隔2分鐘換一次水,共換水15次。
3、電泳:
 1)點樣
     取一張膜條,將膜條無光澤面向下,放入培養皿中得巴比妥緩沖液中使膜條侵透,取出,用玻璃紙吸干,以薄膜的無光澤面距一端1.5厘米處做點樣線,將牛血清樣品與待測的牛血清白蛋白溶液分別用點樣器在同一張薄膜的點樣線處不同位置點樣。
2)電泳
     將點樣后的膜條置于電泳槽架上,放置時無光澤面向下,點樣端置于陰極,平衡5分鐘,開電源160伏60分鐘,關閉電源后用鑷子將膜條取出。
3)染色
   將膜條直接浸于盛有氨基黑10B的染料中,染2分鐘取出,立即浸于漂洗液中,分別在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5分鐘,直至背景漂洗干凈為止。
4.觀察結果
     比較樣品與待測液中白蛋白在薄膜上的電泳結果。
? 實驗儀器:離心管、離心機、試管、玻璃紙、燒杯、滴管、玻璃棒、電泳儀、醋酸纖維素薄膜、分光光度計。
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